リアルタイムPCR法による細菌数の評価(C0737)
サンプル中の細菌について、単離・培養せず、DNAから分析します
概要
食品の細菌検査等で実施される菌数の測定は、培養してコロニー数をカウントすることで算出しますが、この方法では培養に時間を要し、また、難培養性の菌では評価ができません。一方、リアルタイムPCR法では、培養せずにサンプルから直接DNAを抽出することで、目的の菌の存在量（DNAコピー数）を調べることができます。本資料では、培養が容易な大腸菌を用いて、培養してカウントした菌数と、リアルタイムPCR法で測定したコピー数を比較した事例を紹介します。
測定例
大腸菌培養液を段階希釈してコロニー数カウントを行い、菌数を算出しました。それと同時に、大腸菌培養液それぞれからDNA抽出を行い、リアルタイムPCR法にてふたつのターゲット遺伝子（※）の測定を行い、結果を比較しました。
※測定したターゲット遺伝子
・uidA: シングルコピー遺伝子→ひとつの細胞にひとつの領域
・16S rRNA: 複数コピー遺伝子→ひとつの細胞にふたつ以上の領域
大腸菌では7コピーとされている
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● 16S rRNA コピー数（copies/mL）を7で割ったもの
● uidA コピー数（copies/mL）
● 菌数（コロニー/mL）
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左のグラフにおいて、菌数（●）と比べ、16S rRNA コピー数/7（●）とuidA コピー数（●）のどちらも1オーダー以上のずれは見られませんでした。
これらの結果より、コピー数から菌数を推測できると考えられます。 |
| MST技術資料No. | C0737 |
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| 掲載日 | 2025/06/19 |
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| 測定法・加工法 | その他
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| 製品分野 | バイオテクノロジ
医薬品
化粧品
日用品
食品
環境
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| 分析目的 | その他
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